ДИРОФІЛЯРІОЗ (Dirofilaria immitis + D. repens) (ПЛР)
Досліджуваний матеріал Венозна цільна кров
Метод визначення ПЛР Real-time
Dirofilaria immitis і Dirofilaria repens – паразитичні нематоди, що належать до надродини Filarioidea. Остаточними господарями паразитів є собаки, у рідкісних випадках – коти. Крім собак, зараженню піддаються лисиці, вовки, койоти, дикі коти, тхори, ондатри, носухи, морські леви, а також люди. Проміжними господарями є комарі родів Aedes, Anopheles і Culex.
Після інокуляції 2-3 місяці личинки перебувають у підшкірній клітковині та м’язах, за цей час вони двічі линяють.
Самки виділяють у кровоносне русло личинок – мікрофілярій, які можуть жити в кровоносних судинах внутрішніх органів протягом кількох місяців. Це личинки першої стадії, які ще називають «личинки стадії L1». При живленні комарів на інвазованих тваринах мікрофілярії потрапляють в організм комах, де протягом приблизно двох тижнів розвиваються до стадії L3. Під час укусу комара інвазійні личинки проникають в організм остаточного господаря, після чого мігрують у підшкірну клітковину і м’язи. Протягом наступних кількох місяців личинки двічі линяють, проходячи стадії розвитку L4 і L5. Стадія L5 – незрілі дорослі особини гельмінтів, які досягають довжини 1-2 см. Молоді особини D. repens залишаються паразитувати в межах підшкірної клітковини, іноді зазнаючи атипічної міграції (в очі, нервову систему тощо). Особи D. immitis мігрують у системний кровотік і потоком крові заносяться в легеневі артерії. Зазвичай, через 7-9 місяців після початку інвазії в крові циркулюють мікрофілярії. Тривалість життя гельмінтів у організмі собаки може сягати семи років від моменту зараження. Молоді та дорослі особини D. immitis локалізуються переважно у каудальних легеневих артеріях, іноді мігруючи в головні легеневі артерії, при важкій інвазії – в праві відділи серця та великі вени.
Наявність дорослих червів у легеневих артеріях призводить до розвитку реактивних уражень судин, які спричиняють зниження податливості судинної стінки та зменшення просвіту судини. Тяжкість уражень залежить від ряду факторів, включаючи кількість червів, тривалість їхнього паразитування та індивідуальні особливості взаємодії «паразит–господар». Характерним симптомом при серцевому дирофіляріозі є ворсинчаста міоінтимальна проліферація легеневих артерій. Ураження ендотелію судин спричиняють тромбоз, а також периваскулярну тканинну реакцію і періартеріальний набряк. Розвиток алергічного еозинофільного альвеоліту може сприяти ураженню паренхіми легенів. Наявність мертвих червів посилює імунну відповідь і ускладнює ураження легенів. Частини мертвих червів і тромби спричиняють тромбоемболію і посилюють запальну реакцію, що призводить до розвитку фіброзу. Серцево-легеневий дирофіляріоз є однією з причин легеневої гіпертензії в ендемічних регіонах.
Dirofilaria repens спричиняє шкірну форму дирофіляріозу. Дорослі черви, які досягають довжини 15 см, локалізуються у підшкірній клітковині. Життєвий цикл подібний до такого в D. immitis. Тривалість препатентного періоду становить 6-8 місяців. Інвазія зазвичай проходить у субклінічній формі, в деяких випадках може розвиватися дерматит, що супроводжується локальною алопецією, свербінням, еритемою та утворенням скоринок.
Як основний метод дослідження при проведенні скринінгу на серцево-легеневу форму дирофіляріозу рекомендується використовувати тести визначення антигену дорослих дирофілярій. Виявлення циркулюючого антигену можливе через 6,5-7 місяців після інвазування, але не раніше п’яти місяців.
Молекулярні методи дослідження дозволяють підвищити точність остаточного діагнозу. На сьогоднішній день існують тест-системи ПЛР, що використовуються в нашій лабораторії і дозволяють виявляти ДНК дирофілярій у зразках цільної крові, а також диференціювати інвазію D. immitis і D. repens.
Преаналітика:
Порядок дій:
- Провести процедуру відбору крові 0,5 мл.
- Після внесення біоматеріалу в пробірку з фіолетовою кришкою (ЕДТА) обережно перевернути пробірку 6-7 разів для перемішування матеріалу з антикоагулянтом.
- Зберігати у вертикальному положенні при 2°С…8°С.
- Промаркувати номером направлення.
- Заповнити направлення.
- Температурний режим транспортування в лабораторію 2°С…8°С.
Інтерпретація результату: Результати дослідження містять інформацію для ветеринарів. Діагноз ставиться на основі комплексної оцінки різних показників і додаткових досліджень.
«Виявлено»: у аналізованому зразку біоматеріалу знайдено фрагмент ДНК, специфічний для комплексу Dirofilaria (D. immitis або D. repens), що свідчить про наявність інфекції із зазначенням виду.
«Не виявлено»: у зразку біоматеріалу не знайдено фрагментів ДНК, специфічних для Dirofilaria (D. immitis або D. repens), або концентрація патогена у зразку нижча за межу чутливості методу.